Определение числа тромбоцитов в крови. Подсчет тромбоцитов по методу фонио Как считать тромбоциты в мазке

Норма: 180–320×109/л (200–400×109/л)
Тромбоциты (кровяные пластинки) - это безъядерные клетки диаметром 2–4 мкм, являющиеся «осколками» цитоплазмы мегакариоцитов костного мозга.

Морфология тромбоцитов

В крови здорового человека при световой микроскопии (окраска
по методу Романовского - Гимза) различают четыре основные формы тромбоцитов:

1. Нормальные (зрелые) тромбоциты (87,0 ± 0,13 %) - круглой или овальной формы диаметром 3–4 мкм; в них видна бледно-голубая наружная зона (гиаломер) и центральная (грануломер) с азурофильной зернистостью.

2. Юные (незрелые) тромбоциты (3,20 ± 0,13 %), несколько больших размеров с базофильной цитоплазмой, азурофильная грануляция (мелкая и средняя) располагается чаще в центре.

3. Старые тромбоциты (4,10 ± 0,21 %) могут быть круглой, овальной, зубчатой формы с узким ободком тем ной «цитоплазмы», с обильной грубой грануляцией, иногда наблюдаются вакуоли.

4. Формы раздражения (2,50 ± 0,1 %) больших размеров, вытянутые, колбасовидные, хвостатые, «цитоплазма» в них голубая или розовая, азурофильная зернистость рассеяна или разбросана неравномерно.

Гиаломер тромбоцитов (основа пластинки) ограничен трехслойной мембраной, которая, по-видимому, идентична мембране других клеток кроветворной ткани. Мембрана клетки инвагинирует и соединяется с сетью многочисленных каналов (так называемая открытая канальцевая система - ОКС), которые тесно переплетены внутри тромбоцита.

Наружная клеточная оболочка и ОКС усеяны гликопротеинами, играющими важную роль в адгезии и агрегации тромбоцитов.

В цитоплазме тромбоцитов можно обнаружить 4 вида гранул различной структуры, формы и величины, равномерно распределенные в кровяной пластинке или чаще собранные в ее центре (грануломер).

Наиболее многочисленные α-гранулы содержат тромбоцитоспецифические и тромбоцитонеспецифические пептиды, участвующие в механизмах коагуляции, воспаления, иммунитета и репарации.

Плотные гранулы представляют собой богатое хранилище АДФ и серотонина - веществ, способствующих агрегации тромбоцитов; а также антиагреганта АТФ и основного кофактора коагуляции Са2+. Лизосомальные гранулы содержат гидролитические ферменты, а пероксисомы - каталазу.

Функции тромбоцитов

Основные функции тромбоцитов

• Запуск немедленного гемостаза за счет адгезии и агрегации тромбоцитов, что приводит к формированию тромбоцитарной пробки;
• местное выделение вазоконстрикторов для уменьшения кровотока в пораженном участке;
• катализ реакций гуморальной системы свертывания с образованием в конечном счете фибринового сгустка;
• инициирование репарации ткани;
• регулирование местной воспалительной реакции и иммунитета.

Нестимулированные тромбоциты циркулируют в виде гладких дискоидных клеток с незначительной метаболической активностью. Такие тромбоциты не вступают в физиологически значимое взаимодействие с другими форменными элементами крови или монослоем эндотелиальных клеток.

Физиологическая активация тромбоцитов начинается только тогда, когда поврежден сосудистый эндотелий и обнажен субэндотелиальный внеклеточный матрикс. В тромбоцитарной мембране возникают волны возбуждения и формируется большое количество коротких нитевидных псевдоподий или филоподий. В результате этого процесса значительно увеличивается площадь поверхности мембраны, что необходимо для катализа реакций гуморальной системы. С инициированием активации тромбоцитов внутриклеточные органеллы сосредотачиваются в центре клетки, после чего происходит слияние мембран плотных и α-гранул друг с другом, с клеточной мембраной и с мембранами ОКС. Это приводит к экзоцитозу содержимого гранул в наружную микросреду. Происходящий в это время каскад аутоактивации тромбоцитов, синтез ромбоксана и выделение содержимого гранул приводят к появлению тромбоцитарного агрегата, прошитого фибриногеновыми мостиками с участием гликопротеина мембранных рецепторов соседних тромбоцитов.

Известно, что мегакариоциты синтезируют и депонируют в α-гранулах факторы свертывания V, VIII, XIII и фибриноген, которые выбрасываются в микросреду при активации тромбоцитов. Тромбоцитарные мембраны играют не менее важную роль в запуске специфических реакций свертывания.

Методы подсчета тромбоцитов

Метод Фонио

Наиболее распространенный метод подсчета тромбоцитов - метод Фонио (готовят мазок и красят его по Романовскому - Гимза; считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов).

Подсчета тромбоцитов в камере Горяева

Существует также метод подсчета тромбоцитов в камере Горяева: кровь разводят 1% раствором оксалата аммония, или раствором, приготовленным по сложной прописи (см. ниже), или 5–7% раствором трилона Б (для предотвращения свертывания крови и агглютинации кровяных пластинок), заполняют камеру и подсчитывают тромбоциты по обычному правилу.

Метод люминесцентной микроскопии

Меньшее распространение получили методы определения количества тромбоцитов с помощью люминесцентной микроскопии.

Метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков

В настоящее время наиболее перспективен метод подсчета с использованием электронно-автоматических счетчиков в разведенной пробе после лизиса эритроцитов (для подтверждения данных лабораторного анализа необходимо исследовать мазок периферической крови).

Количественное определение тромбоцитов

Количественное определение тромбоцитов по методу Фонио

• Капилляром Панченкова набирают 14% раствор сернокислого магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в количестве 25 мкл (до метки «75») и вносят в пробирку;
• кровь из пальца набирают полный капилляр (до метки «0») и выливают всю кровь в пробирку;
• содержимое пробирки тщательно перемешивают и из смеси готовят мазок, который фиксируют и окрашивают по Романовскому - Гимза. Если в качестве стабилизатора был взят раствор сернокислого магния, то продолжительность окраски составляет 2–3 часа, а при использовании раствора ЭДТА - 30–45 минут;
• наносят на край мазка - в тонкой его части - иммерсионное масло;
• считают количество тромбоцитов, встретившихся при подсчете 1000 эритроцитов; при подсчете, чтобы не сбиться, рекомендуется прибегать к ограничению поля зрения путем применения окуляров, поле зрения которых разделено сеткой.

Зная количество эритроцитов в 1 мкл крови и число тромбоцитов на 1000 эритроцитов, вычисляют количество тромбоцитов в 1 мкл крови.

где Э - число эритроцитов в 1 мкл.

Количественное определение тромбоцитов в камере Горяева

• В пробирку наливают 4 мл раствора, приготовленного по сложной прописи (3 г кокаина солянокислого, 0,25 г хлористого натрия, 0,025 г фурацилина, 100 мл дистиллированной воды)* или 4 мл 1% раствора оксалата аммония;

* На практике в клинических лабораториях, ввиду принадлежности кокаина к наркотическим веществам, используют пропись следующего состава: новокаина гидрохлорида 3,5 г; натрия хлорида 0,25 г; воды дистиллированной до 100 мл. Время гемолиза эритроцитов составляет около 60 мин.

• капиллярной пипеткой набирают 20 мкл крови, осторожно выдувают ее в пробирку с реактивом и ополаскивают пипетку. Смесь хорошо перемешивают и оставляют на 25–30 минут для гемолиза эритроцитов;
• после повторного перемешивания заполняют камеру Горяева, которую помещают во влажную камеру;
• через 5 минут производят подсчет количества тромбоцитов в 25 больших квадратах с использованием фазово-контрастного устройства.

Формула для подсчета тромбоцитов:

где а - количество тромбоцитов в 400 малых квадратах;
П - степень разведения (200).

Количественное содержание тромбоцитов

Норма: 180–320 × 109/л (200–400 × 109/л)

Увеличением количества тромбоцитов характеризуются:

• миелопролиферативные процессы (эритремия, миелофиброз);
• хронические воспалительные заболевания (ревматоидное поражение суставов, язвенный колит, туберкулез, остеомие лит, цирроз печени);
• злокачественные новообразования (рак, лимфома, лим фо гра нуле матоз);
• кровотечения, гемолитическая анемия;
• период выздоровления при мегалобластных анемиях;
• после операций;
• состояние после спленэктомии;
• лечение кортикостероидами.

Уменьшением количества тромбоцитов (тромбоцитопенией) характеризуются:

• наследственные тромбоцитопении, вызванные снижением образованиятромбоцитов(врожденнаятромбоцитопения, синдром Уискотта-Олдрича, синдром Бернара - Сулье, аномалия Чедиака - Хигаси, синдром Фанкони, краснуха новорожденных, гистиоцитоз);
• болезни крови (апластическая анемия, мегалобластные анемии, лейкозы);
• поражение костного мозга (метастазы новообразований, туберкулезное поражение, ионизирующее облучение);
• другие заболевания (циклическая тромбоцитопения, пароксизмальная ночная гемоглобинурия, гемолитико-уремический синдром, почечная недостаточность, заболевания печени, опухоли сосудов, селезенки, эклампсия, гипертиреоз, гипотиреоз);
• инфекции (вирусные, бактериальные, риккетсиозы, маля рия, токсоплазмоз, ВИЧ-инфекция);
• беременность, менструации;
• действие лекарственных препаратов (цитостатиков, анальгетиков, антигистаминных средств, антибиотиков, психотропных лекарств, диуретиков, противосудорожных средств, витамина К, резерпина, дигоксина, гепарина, нитроглицерина, преднизолона, эстрогенов и др.);
• действие алкоголя, тяжелых металлов;
• тромбоцитопении, вызванные повышенным потреблени ем тромбоцитов (тромбоцитопеническая пурпура, гиперспленизм, ДВС-синдром, кровотечения, гемодиализ).

Кровяные пластинки обладают групповой специфичностью, соответствующей групповой специфичности эритроцитов. Это должно учитываться при переливании тромбоцитарной массы.

Норма у здорового человека:

Исследование по методике Фонио применяется наиболее часто. Оно базируется на определении количества пластинок в окрашенных мазках крови с использованием химреактивов:

• сульфат магния 14%;
• этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) натрия 6%.

Подсчет тромбоцитов в мазке крови

Ход исследования

Сульфат магния или ЭДТА при помощи капилляра Панченкова помещают в стеклянную пробирку, туда же помещают капиллярную кровь, которую берут, используя тот же капилляр.

Кровь с реактивом перемешивают, а затем из полученного раствора готовят материал для определения.

Для этого на предметное стекло наносятся тонкие мазки, они фиксируются и окрашиваются:

• с применением магния сульфата – 2-3 часа;
• с использованием ЭДТА – 30-45 минут.

После высыхания мазки разглядывают под микроскопом, у которого имеется иммерсионный объектив для увеличения изображения и усиления яркости.

Кровяные пластинки должны располагаться по отдельности, чтобы этого добиться используется самое тонкое место мазка.

Как считать тромбоциты в мазке крови?

Для подсчета мазок передвигается под объективом микроскопа, чтобы были подсчитаны 1000 эритроцитов. Затем считают находящиеся среди них кровяные пластинки.

При известном количестве эритроцитов в одном литре крови, можно произвести подсчет абсолютного числа тромбоцитов.

Определение количества при помощи камеры Горяева

По методу Горяева тромбоцитарные пластинки считает камера с применением цитратного вещества. Число клеток определяют в 1 МК/л или в литре крови.

Для этого используют следующие химреактивы:

Химреактив №1:

• гидрохлорид кокаина 3 г;
• хлорид натрия 0,25 г;
• фурацилин 0,25 г;
• вода 100 мл.

Химреактив №2:

• 1% раствор оксалата аммония. Раствор надо прокипятить, профильтровать и после этого он хранится на холоде. При помощи этого реактива растворение эритроцитов происходит быстрее.

Ход исследования

Используют материал, взятый из вены в пробирку с цитратом. Этим веществом служит ЭДТА. При взятии из пальца тромбоциты могут давать сгустки.

Нужно взять 4 мл химреактива №1 или №2, добавить 0,02 мл крови, получится разведение в 200 раз. Кровь с реактивом слегка взбалтывают, оставляют на полчаса, за это время происходит лизис.

В подготовленную камеру помещают материал из подготовленной крови, а затем опускают во влажную чашку Петри на 5 минут для оседания тромбоцитарных клеток.

В камере клетки хорошо видны, благодаря тому, что используется фазово-контрастные линзы объектива.

Частицы пыли и грязи должны быть хорошо вымыты, чтобы не оставлять след на стеклянной таре и самой камере, иначе их при подсчете можно принять за тромбоциты.

Подсчитывание с помощью счетчиков

Счетчик называется автоматический гематологический аппарат. С его помощью можно определить количество кровяных пластинок, также сделать гистограмму (распространение по величине).

Аппаратное исследование достаточно точное, делается экспресс-методом, который выдает результаты в течение 1 минуты.

Один из самых распространенных методов лабораторного исследования состава крови – тромбоциты по Фонио.

Этот метод получил популярность благодаря тому, что полученный биоматериал можно исследовать не сразу, а в течение нескольких часов после забора, что для многих лабораторий является немаловажным фактором.

Анализ может дать небольшую погрешность, поэтому при необходимости его можно повторить через 3 – 5 дней.

Но к такому решению прибегают редко: как правило, если требуется высокая точность результатов, используются более дорогие и точные методы исследований.

Кровь любого человека состоит из плазмы (жидкой среды), в которой в свободном состоянии находятся несколько типов кровяных клеток: лейкоциты, тромбоциты и эритроциты.

Каждый тип кровяных клеток выполняет свою определенную функцию в организме, поэтому коагулограмму крови (лабораторное исследование на состав) часто используют для диагностики различных заболеваний и оценки общего здоровья организма.

Тромбоциты – это маленькие безъядерные клетки. Их часто называют красными кровяными тельцами из-за характерной окраски. Основная функция тромбоцитов – останавливать кровоток в месте нарушения целостности сосуда.

Именно тромбоциты закрывают место кровотечения, образовывая своего рода пробку. После перекрытия места повреждения тромбоциты ускоряют процесс свертывания плазмы и способствуют заживлению поврежденного участка.

Тромбоциты способны выделять специальные ферменты, которые способствуют ускорению процесса деления клеток, поэтому считаются незаменимым внутренним механизмом по стимуляции регенерации поврежденных тканей. Тромбоциты отвечают за регулировку проницаемости и эластичности сосудов.

Красные кровяные клетки живут совсем недолго, от 5 до 8 дней. В зависимости от стадии развития выделяют юные тромбоциты, зрелые и старые.

В небольших количествах в крови могут присутствовать так называемые «формы раздражения» и «дегенеративные формы», которые выделяются при появлении патологических процессов в организме. У здорового человека до 95 % красных кровяных клеток находятся в стадии зрелости.

Как проходит анализ?

Для измерения количества тромбоцитов используется артериальная кровь (из пальца). Забор материала обычно проходит с утра, поскольку для получения достоверных результатов важно, чтоб пациент не ел в течение 8 – 10 часов и избегал физических нагрузок.

Первую каплю крови, появляющуюся сразу после прокола, обычно не используют для проведения анализа.

Лаборант должен протереть палец сухой стерильной марлей или ватой, а к забору биоматериала приступить только со второй появившейся капли крови.

Для проведения исследования кровь необходимо смешать с 14 % раствором магнезии, чтобы предотвратить свертывание. Лаборант может нанести раствор непосредственно на палец или в пробирку.

Для более быстрого получения результатов в пробирке кровь могут смешать с раствором ЭДТА. Далее к полученному биоматериалу добавляют специальные реагенты и наносят на предметное стекло.

После того как мазок высохнет, его начинают окрашивать, чтобы фракции кровяных клеток можно было рассмотреть под микроскопом. Окраска может занять от получаса до нескольких часов в зависимости от качества реагентов.

Подсчет проводят визуально, с использованием специальных сегментированных окуляров. На такие окуляры нанесена специальная расчетная сетка, которая облегчает подсчет.

Окрашенный тромбоцит приобретает розоватый или фиолетовый оттенок, в зависимости от возраста клетки. Именно поэтому тромбоциты принято называть красными кровяными тельцами.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио производят относительно количества эритроцитов. Предметное стекло с мазком постепенно передвигают под микроскопом и считают количество эритроцитов.

Как только счет достигает 1000, переходят к подсчету тромбоцитов на этом же участке. При исследовании учитываются только скопления клеток.

Кровяные тельца, находящиеся в относительном удалении от группы клеток аналогичного типа, считаются исключением и медицинского значения не имеют.

В некоторых лабораториях исследование проходит почти полностью автоматически. Современные микроскопы способны распознавать различные типы кровяных клеток и производить расчет без помощи человека. Такие микроскопы подсчитывают общее количество различных кровяных клеток и их соотношение.

Количество тромбоцитов подсчитывают относительно к эритроцитам, поскольку это самые крупные кровяные клетки.

Кроме того, количество тромбоцитов на микролитр крови имеет прямую зависимость с количеством эритроцитов: если вследствие какой-либо патологии увеличивается содержание эритроцитов, общее число тромбоцитов будет превышать допустимую норму.

Подсчет тромбоцитов по Фонио имеет свои преимущества. При таком исследовании результаты могут быть готовы очень быстро, от 20 минут.

Для проведения анализа не требуется дорогостоящих реагентов, только антикоагулянт и красители. С другой стороны, составление коагулограммы (более полного описания состава крови) более целесообразно, если необходимо получить общее представление о здоровье пациента.

При коагулограмме можно исследовать различные показатели, используя достаточно малое количество биологического материала, пациенту не придется сдавать кровь несколько раз.

Что влияет на достоверность результатов?

Достоверность полученных результатов зависит как от самого пациента, так и от лаборатории. Важно, чтобы при проведении исследования использовались только качественные реагенты.

Просроченные или дешевые химические составы могут значительно исказить результаты анализа. В лучшем случае врач сможет определить, что результаты неверны, и назначить повторную сдачу анализа.

В худшем – врачу будет сложно установить правильный диагноз, особенно если показатели крови расходятся с общей клинической картиной.

Помимо качества химических составов, на достоверность результатов влияет и соблюдение технологического процесса проведения исследования.

Соблюдение стерильности, правильная маркировка пробирок, точное соблюдение сроков окрашивания и подсушки, качество оборудования – все это может оказать значительное влияние на достоверность полученных результатов.

Со стороны пациента ответственность за качество исследования заключается в соблюдении правил подготовки к анализу.

Кровь необходимо сдавать строго натощак, по истечении как минимум 8 часов с последнего приема пищи.

Перед забором крови нельзя заниматься спортом: утреннюю пробежку и тренировку в спортзале необходимо перенести.

За 24 часа до проведения анализа пациент должен отказаться от алкогольных напитков, поскольку спирт увеличивает количество лейкоцитов и тромбоцитов в несколько раз.

За 2-3 дня до анализа стоит избегать стресса, повышенных физических нагрузок и психоэмоциональных перегрузов: все эти факторы способны временно изменить состав крови, нарушив соотношение различных типов кровяных тел.

Если вы находитесь на медикаментозном лечении, то необходимо согласовать с врачом прием медикаментов накануне сдачи анализа.

Некоторые лекарственные препараты могут внести временные изменения в состав крови. Врач либо порекомендует отказаться от медикаментов за 8 – 20 часов до сдачи анализа, либо будет принимать во внимание текущее лечение при расшифровке результатов исследования.

Расшифровка результатов

В справке о результатах анализа обычно указывается количество тромбоцитов по Фонио и норма, с которой пациент может сравнить свои показания.

Допустимое содержание тромбоцитов в одном кубическом миллиметре крови различается для мужчин и женщин, и довольно сильно зависит от возраста.

Для младенцев до года пределы нормы достаточно широки: от 100 до 400 тысяч на миллиметр кубический крови. После года норма для ребенка становится аналогичной норме для взрослых: от 180 до 350 тысяч.

Для мужчин до 40 – 45 лет нормальным считается содержание от 180 до 400 тысяч. Чем старше мужчина, тем большее количество тромбоцитов в крови допустимо.

Но в преклонном возрасте уровень тромбоцитов должен несколько сократиться, до максимально допустимого значения в 320 тысяч.

У женщин колебания уровня тромбоцитов в крови связано с возрастом. Максимум в 350 тысяч отмечается в период активного полового созревания, около 15 лет.

Несмотря на то, что и в дальнейшем такой уровень тромбоцитов все еще входит в понятие нормы, в большинстве случаев уровень этих кровяных тел несколько падает.

При менструации количество тромбоцитов сокращается вдвое. Это вызвано природным механизмом: для полноценного отторжения эпителия в матке (менструальные выделения) необходима пониженная свертываемость крови.

Сдавать анализ во время месячных женщинам не рекомендуется, оптимальными считаются первые несколько дней после окончания активных менструальных выделений.

Определение числа тромбоцитов - важнейший метод исследования, способный обнаружить наиболее частое нарушение гемостатического потенциала крови - тромбоцитопению. В настоящее время для определения числа тромбоцитов имеется несколько лабораторных технологий (автоматизированный, по Фонио и др.). Наибольшую точность имеет микроскопический метод при подсчете в камере, однако этот метод требует от врача-лаборанта опыта, напряжения зрения, концентрации внимания.

Принцип метода

Принцип метода основан на определении числа тромбоцитов путем их подсчета в камере Горяева обычной световой микроскопией или с помощью микроскопа с фазово-контрастной приставкой после разведения крови и гемолиза эритроцитов раствором оксалата аммония.

С целью повысить точность микроскопического метода число тромбоцитов подсчитывают в двух камерах, затем вычисляют среднюю арифметическую.

Реактивы и оборудование

• 1% раствор оксалата аммония.
• Смеситель Сали.
• Камера Горяева (2 шт.).
• Световой микроскоп с увеличением х 40 или микроскоп с фазово-контрастной приставкой (например, КФ-4 или др.).

Образцы крови для исследования

Определение числа тромбоцитов возможно в крови, стабилизированной цитратом натрия или нанесенным на стенки пластиковой пробирки мелкодисперсным порошком этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). При использовании микроскопического метода предпочтительнее брать кровь на цитрате натрия, чтобы исключить влияние ЭДТА на результаты подсчета тромбоцитов.

Техника выполнения

В сухую пластиковую пробирку вносят 1,98 мл 1% оксалата аммония и 0,02 мл крови. Медленно и аккуратно перемешивают смесь в течение 2 мин, а затем ее инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. Далее заполняют две камеры Горяева содержимым пробирки и на 10 мин помещают их в чашку Петри, в которой находится влажная марля или смоченный фильтр. После этой инкубации, которая необходима для оседания тромбоцитов, подсчитывают их число в 25 квадратах. Среднюю арифметическую результатов подсчета в двух камерах умножают на 1000. При исследовании цитратной крови результат увеличивают на 10 % и умножают на 1000, что позволяет корректировать разведение венозной крови раствором натрия цитрата.

Оценка результатов исследования

У здорового человека число тромбоцитов в периферической крови колеблется в довольно широком диапазоне - от 150 до 400 х 109/л.

Недопустимо исследование числа тромбоцитов в охлажденных образцах крови. При гемолизе возможно занижение числа тромбоцитов. В ряде случаев при исследовании числа тромбоцитов на гематологических анализаторах встречается так называемая псевдотромбоцитопения, обусловленная агрегацией и группировкой тромбоцитов в присутствии ЭДТА. Эту проблему решает забор крови на цитрате натрия.

Для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов на гематологических анализаторах существуют контрольные образцы с разным содержанием этих клеток. О возможности использования этих образцов для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов микроскопическим методом не существует общепринятых рекомендаций. Для повышения точности результатов микроскопического исследования следует периодически контролировать воспроизводимость результатов определения числа тромбоцитов разными лаборантами в течение рабочего дня и на основе полученных данных повышать точность и снижать вариацию при выполнении этой методики Коэффициент вариации микроскопического метода у опытных лаборантов не превышает 10 %.

Интерпретация результатов исследования

В клинической картине тяжелого течения идиопатической тромбоцитопенической пурпуры доминирует геморрагический синдром. При вторичных тромбоцитопениях геморрагический синдром, как правило, умеренный, и сочетается с клиническими симптомами основного заболевания, обусловившими тромбоцитопению. В тех случаях, когда число тромбоцитов менее 100 х 109/л длительно наблюдается без каких-либо проявлений фонового заболевания, следует думать об идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Тромбоцитозы также наблюдаются при миелопролиферативных заболеваниях. Нередко на фоне миелопролиферации отмечают нарушения реологических свойств крови за счет полиглобулии. В последнем случае, а также при числе тромбоцитов более 700 х 109/л у пациентов повышается риск тромбозов. Однако на фоне миелопролиферативных заболеваний, сопровождающихся тромбоцитозом более 1500 х 109/л, парадоксально наблюдается геморрагический синдром.

При тромбоцитопении и наличии геморрагического анамнеза с раннего детского возраста весьма важно оценить размер тромбоцитов, в т. ч. MPV (средний объем) в мазке крови, а также наличие каких-либо включений в тромбоциты.

Причины ошибок

• Использование одной камеры, меньшее число подсчитываемых квадратов.
• Неточность градуировки разных смесителей.
• Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Недостаточная квалификация лаборанта.

Другие аналитические технологии

Практически все гематологические анализаторы неплохо измеряют число эритроцитов и лейкоцитов в крови, хорошие результаты точности и воспроизводимости демонстрирует метод определения концентрации гемоглобина, реализованный в таких приборах. Однако и в настоящее время еще встречаются образцы анализаторов, которые число тромбоцитов при тромбоцитопениях подсчитывают неточно, и, как правило, наблюдается завышение числа тромбоцитов при их автоматизированном подсчете. Особенно ярко этот недостаток проявляется при работе с образцами крови, в которых число тромбоцитов ниже 50 х 109/л. Этот недостаток есть следствие того, что тромбоциты гораздо мельче других клеток крови, поэтому сложнее выполнить их корректный подсчет в той же камере и такими же техническими приемами, что и другие клетки крови. Следует отметить также, что на показатели точности подсчета тромбоцитов на гематологическом анализаторе весьма существенное влияние оказывают качество и надежность используемых калибраторов. Именно поэтому в сложных диагностических ситуациях или при глубокой тромбоцитопении в анамнезе для уточнения числа тромбоцитов следует применять микроскопический метод.

Подсчет клеток крови в окрашенных мазках имеет низкую точность и воспроизводимость, поэтому он не может быть рекомендован для применения в современных клиниках.

Существуют различные методики подсчёта:

• В камере Горяева.
• По Фонио.
• При помощи люминесцентной микроскопии.
• С применением электронно-автоматических счётчиков.

Подсчёт обычно производится по методу швейцарского хирурга начала 20 века А.Фонио.

Метод Фонио

Подсчёт тромбоцитов по Фонио ― это самый распространённый метод.

Преимущество которого заключается в том, что тромбоциты учитываются не в жидком объёме, а в окрашенном мазке:

• клеточные элементы хорошо видны;
• исследовать материал можно в любое время, а не сразу после получения биологического материала;
• облегчается их «привязкой» к одной тысяче эритроцитов в 1 мл крови.

Кожу пациента протирают досуха.

Возможны два варианта действий лаборанта:

1. На место взятия анализа наносится небольшая капля 14% магнезии для предупреждения свёртывания крови. Полученную каплю крови смешивают с раствором и распределяют по предметному стеклу. Мазок сушат и окрашивают.
2. В пробирку вносят 25 мкл 14% магнезии или 6% ЭДТА и полный стеклянный капилляр крови, полученной из пальца, смешивают инвитро и готовят мазок. Время его высушивания зависит от реактива (2-3 часа при магнезии, 45 минут при ЭДТА). Затем окрашивают.

При исследовании мазка применяют окуляры с полем зрения, разделённым на квадраты, что облегчает подсчёт клеточных элементов.

В каждом квадрате считают эритроциты и тромбоциты. Подсчёт ведётся до обнаружения ровно одной тысячи эритроцитов.

Число тромбоцитов составляет абсолютную величину в промилле по отношению к эритроцитам (‰).

Зная общие цифры эритроцитов в 1 мкл крови, нужно умножить его на результат промилле для определения содержания в 1 мкл крови тромбоцитов:

Т = , где Т ― количество тромбоцитов, Э ― число эритроцитов в 1 мкл.

Исследование по Фонио может иметь погрешности, связанные с плохим качеством мазка и неравномерным распределением по стеклу тромбоцитов.

Подсчёт в камере Горяева является более точным, его погрешность всего 6,5%, но он более трудоёмкий и должен проводиться немедленно после взятия крови.

Для проведения метода кровь разводят реактивом для лизиса эритроцитов в 200 раз, вносят пипеткой в сетки камеры, настраивают фазово-контрастное устройство и под микроскопом считают тромбоциты в 25 больших квадратах.

Для нахождения числа тромбоцитов в 1 мкл крови полученные цифры перемножают на 2000.

Коррекция уровня тромбоцитов

При несоответствии числа тромбоцитов по Фонио норме нужна помощь врача.

Повысить уровень тромбоцитов можно при помощи некоторых кортикостероидов, витаминов, препаратов-коагулянтов Дицинон, Этамзилат, Викасол, Револейт, Содекор.

Для укрепления сосудистой стенки полезна аскорбиновая кислота. В рационе должны быть мясо, морепродукты, гранаты, тыква, шиповник, свёкла, зелень.

Для снижения уровня тромбоцитов назначают препараты магния. В диете должны присутствоватьтакие продукты как лук, чеснок, рыбий жир, оливковое и льняное масло, томатный сок, яблочный уксус, зелёный чай.

Правильный сбалансированный рацион ― залог здорового равновесия свёртывающей системы крови.